1.目的：GMP潔凈區(qū)沉降菌測試方法及測試記錄表 闡述潔凈室空氣中沉降菌檢測操作規(guī)程，保證藥品質(zhì)量，防止生產(chǎn)環(huán)境對(duì)產(chǎn)品的污染。

2.范圍：適用于本公司潔凈區(qū)(室)的沉降菌的監(jiān)測。

3.責(zé)任：沉降菌檢測員。

4.內(nèi)容：GMP潔凈區(qū)沉降菌測試方法及測試記錄表

4.1基本概念：

4.1.1菌落:**培養(yǎng)后,由一個(gè)或幾個(gè)**繁殖而形成的一**集落,簡稱CFU.通常用個(gè)數(shù)表示。

4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法收集空氣中的活性微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。

4.1.3沉降菌菌落數(shù):規(guī)定時(shí)間內(nèi)每個(gè)平板培養(yǎng)皿收集到空氣中沉降菌的數(shù)目，以個(gè)/皿表示。

4.2測試原理:本測試方法利用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來評(píng)定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評(píng)定潔凈區(qū)的潔凈度。

4.3測試方法：

4.3.1使用的儀器設(shè)備和培養(yǎng)基:

    高壓**鍋:使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。

    恒溫培養(yǎng)箱:必須定期對(duì)培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定。

    培養(yǎng)皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。使用前將培養(yǎng)皿置于121℃濕熱**20min。

    培養(yǎng)基:胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基。

將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約45℃在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入32℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在2-8℃的壞境中存放。

4.3.2測試時(shí)間:

    對(duì)單向流，如*凈化房間內(nèi)及層流工作臺(tái)，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10分鐘后開始。

    對(duì)非單向流，如B級(jí)、C級(jí)、D級(jí)以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30分鐘開始。

4.3.3采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置:

采樣點(diǎn)數(shù)目下限值:沉降菌的采樣點(diǎn)數(shù)下限值可按表1確定。在滿足*少測點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，不宜滿足*少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2

表1 采樣點(diǎn)數(shù)下限值

表2 培養(yǎng)皿數(shù)下限值

    采樣點(diǎn)的布置:

    除受潔凈區(qū)的設(shè)備限制外，取樣點(diǎn)應(yīng)在整個(gè)潔凈區(qū)均勻布置。

    在日常監(jiān)控時(shí)，那些與產(chǎn)品相鄰近的區(qū)域，以及可能與產(chǎn)品直接接觸的空氣及設(shè)備附近應(yīng)考慮增加取樣點(diǎn)和取樣次數(shù)(與產(chǎn)品非接觸區(qū)相比，這些區(qū)域應(yīng)視為關(guān)鍵區(qū)):人員活動(dòng)頻繁或人員較集中的區(qū)域也應(yīng)視為關(guān)鍵區(qū)，需加強(qiáng)監(jiān)控。

    取樣點(diǎn)一股布置在趾離地面0.8-1.0m之間或操作平臺(tái)的高度。

    取樣時(shí)，取樣沒備會(huì)對(duì)氣流產(chǎn)生干擾，取樣時(shí)應(yīng)避免可能對(duì)氣流組織的干擾。

    盡量避免在回風(fēng)口附近取樣(距離lm以上)，且測試人員應(yīng)在取樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少走動(dòng)。

4.3.4測試步驟：

4.3.4.1采樣方法:

    用無菌容器(如不銹鋼儲(chǔ)槽)將預(yù)先培養(yǎng)的培養(yǎng)皿(無菌平皿)帶至待測區(qū)，將培養(yǎng)皿取出，放置在預(yù)先確定取樣點(diǎn)，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時(shí)，再將培養(yǎng)皿蓋上，蓋后倒置。檢測時(shí)記下培養(yǎng)皿打開的起始時(shí)間和結(jié)束時(shí)間。

4.3.4.2培養(yǎng)：

全部采樣結(jié)束，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。32℃培養(yǎng)，時(shí)間為72小時(shí)。

每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定三個(gè)培養(yǎng)皿做對(duì)照培養(yǎng)。

4.3.4.3菌落計(jì)數(shù):

    用肉眼直接計(jì)數(shù)，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上計(jì)數(shù)。

4.3.5注意事項(xiàng)：

    測試用具要做**處理，以確保測試的可靠性、正確性。

    采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。

    對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。

由于**種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

    采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。

測試狀態(tài):

    沉降菌測試前，被測試潔凈區(qū)的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差必須控制在規(guī)定值內(nèi)。

    沉降菌測試前，被測試潔凈區(qū)己經(jīng)過**。

    測試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，在空調(diào)系統(tǒng)驗(yàn)流時(shí)、停產(chǎn)恢復(fù)生產(chǎn)前、設(shè)施設(shè)備大修復(fù)產(chǎn)前進(jìn)行靜態(tài)測試，在日常監(jiān)測時(shí)進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測。

    測試人員:測試人員必須穿戴符合環(huán)境的工作服。靜態(tài)測試時(shí)，室內(nèi)測試人員不得多于2個(gè)人。

結(jié)果計(jì)算:

用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。

平均菌落數(shù)的汁算見下式:

計(jì)算公式：

M =（M1+M2+…+MN）/n

式中M為平均菌落數(shù)（CFU）

Mi表示1，2，3，……n號(hào)平皿菌落數(shù)；n表示平皿總數(shù)。

6．標(biāo)準(zhǔn)：

7.結(jié)果評(píng)定:

    用平均菌落數(shù)判斷潔凈室的空氣中的微生物。

    潔凈區(qū)內(nèi)的平均菌落數(shù)必須符合所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。

    若某潔凈區(qū)的菌落數(shù)過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先行**，然后重新測試兩次，測試結(jié)果必須合格。

8.偏差糾正

    一旦發(fā)現(xiàn)空氣微生物監(jiān)測結(jié)果標(biāo)，一般可以采取以下行動(dòng)進(jìn)行調(diào)查和評(píng)估:

GMP潔凈區(qū)沉降菌測試方法及測試記錄表